植物維生素D(VD)elisa試劑盒
Plant Vitamin D,VD ELISA Kit
96孔酶標包被板
48孔酶標包被板
植物維生素D(VD)ELISA試劑盒 種屬:人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。【免費代測】
植物維生素D(VD)ELISA試劑盒
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Human salivary duct autoantibody,SDA ELISA Kit
人elisa試劑盒常年優(yōu)惠,人狼瘡抗凝抗體ELISA試劑盒,(LAC/LA)Elisa試劑盒
8-iso-PG kit,人(8-iso-PG)Elisa試劑盒
Elisa試劑盒規(guī)格,96T/48T
兔子elisa試劑盒,兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9ELISA試劑盒,(MMP-9)Elisa試劑盒
Elisa試劑盒規(guī)格,96T/48T
Elisa試劑盒規(guī)格,96T/48T
人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體(AGA)ELISA試劑盒
Rat Glucose-dependent insulin-releasing polypeptide,GIP ELISA Kit
大鼠白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒
Elisa試劑盒規(guī)格,96T/48T
GSK kit,人(GSK)Elisa試劑盒
PoFAine Interferon α,IFN-α ELISA Kit
植物維生素D(VD)ELISA試劑盒
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%
植物維生素D(VD)ELISA試劑盒 全國廠家直接銷售:北京、上海、廣州、深圳、江蘇、青島、山東、東北等全國各省市區(qū)均現(xiàn)貨銷售,送貨上門
植物維生素D(VD)ELISA試劑盒,Elisa價格,說明書
產(chǎn)品貨號:DM-P5517
產(chǎn)品規(guī)格:48/96T
概述:
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附檢測)是一種平板檢測技術(shù),旨在檢測和定量肽、蛋白質(zhì)、抗體和激素等物質(zhì)。其他名稱,比如酶 免疫測定(EIA)也用于描述該的技術(shù)。在 ELISA 中,抗原必須固定化到固體表面,然后與連接到酶的抗體混合。通過 與適當?shù)牡孜锓跤,測量報告基因酶的活性來產(chǎn)生可測量的產(chǎn)物,從而實現(xiàn)檢測。該檢測策略中的最關(guān)鍵元素是高度特 異性的抗體-抗原相互作用。
ELISA試劑盒的特點有:
一、高效、靈敏、特異的抗體
二、節(jié)省實驗經(jīng)費
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型
五、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性
ELISA 試劑盒主要保證規(guī)格概述規(guī)格 | 描述 | 這些對您的好處是? |
標準品校準 | 校準符合國家生物標準和控制研究所 (NIBSC) 標準 (如可用) | 可在多個平臺上實現(xiàn)準確定量和一致的參考標準 |
精度 | 板間 CV <10%<10% 的平均板內(nèi) CV | 獲得一致的結(jié)果 |
稀釋線性度 | 檢測范圍內(nèi)的線性結(jié)果 | 可準確定量連續(xù)稀釋樣品 |
平行性 | 重組蛋白標準品模擬天然蛋白 | 可靠地檢測樣品 |
回收率 | 緩沖液經(jīng)過優(yōu)化,可最大限度減少基質(zhì)效應(yīng) | 有助于確保對血清和血漿等復(fù)雜基質(zhì)內(nèi)的樣品進行準確定量分析 |
靈敏度 | 針對特定檢測類型檢測相關(guān)水平的蛋白 | 實現(xiàn)低水平蛋白檢測 |
特異性 | 使用類似分析物進行交叉反應(yīng)性測試 | 幫助確保準確測量目標蛋白質(zhì) |
批次間一致性 | 對內(nèi)部控制進行測試,以評估數(shù)據(jù)是否在設(shè)定范圍內(nèi) | 有助于確保新批次獲得一致的結(jié)果 |
檢測內(nèi)精度
檢測內(nèi)驗證顯示檢測板內(nèi)孔間的重現(xiàn)性。檢測內(nèi)驗證產(chǎn)生的數(shù)據(jù)有助于確保在板的不同孔中檢測的樣品給出可比較結(jié)果。以下是為具有代表性的板內(nèi)驗證實驗生成和報告的數(shù)據(jù)示例。在本示例中, 通過在同一檢測中檢測三個樣品各重復(fù) 14 次來評估 Invitrogen VCAM-1 人 ELISA 試劑盒。每個樣品的 %CV 表明該檢測具有良好的重現(xiàn)性。具有已知 Hu sVCAM-1 濃度的樣品重復(fù)檢測14 次,以確定檢測的精度。
參數(shù) | 樣品 1 | 樣品 2 | 樣品 3 |
平均值(ng/mL) | 1.23 | 4.33 | 18.59 |
標準差 | 0.06 | 0.33 | 1.43 |
變異系數(shù) (%CV) | 4.85 | 7.62 | 7.68 |
檢測間精度顯示不同日期進行的檢測間重現(xiàn)性。檢測間精度通常為< 10%。這確保獲得的結(jié)果隨著時間的推移和試劑盒之間保持一致。以下是為檢測間精度生成和報告的典型數(shù)據(jù)示例。在該示例中, 使用 Invitrogen 淀粉樣蛋白 β 42 人 ELISA 試劑盒在多天內(nèi)檢測三份樣品,共檢測 36 次。結(jié)果顯示變異系數(shù)小于 10%,從而證明了檢測間良好再現(xiàn)性。
參數(shù) | 樣品 1 | 樣品 2 | 樣品 3 |
平均值(ng/mL) | 71.30 | 40.16 | 21.29 |
標準差 | 5.24 | 3.96 | 1.13 |
Coefficient of Variation (% CV) | 7.36 | 9.85 | 5.32 |
線性是相對于基于標準曲線的分析物計算量來定義。樣品中分析物的最終計算濃度應(yīng)與檢測定量范圍內(nèi)的任何稀釋濃度相同。開發(fā)完善的免疫檢測試劑盒可最大限度地減少不同樣品基質(zhì)和其他可能干擾的因素的潛在影響。稀釋線性驗證實驗提供了關(guān)于在不同稀釋水平下測試的樣品結(jié)果精度的信息。對每種經(jīng)驗證樣品類型進行稀釋線性測試,如果結(jié)果是每種稀釋預(yù)期濃度的 70%-130%,則視為良好。線性對于在測定的動態(tài)范圍內(nèi)準確測量分析物濃度非常重要,可使用公式計算:
% 線性度 = (稀釋后測量濃度 / 預(yù)期濃度) x 100
特定樣品類型的稀釋線性度通常如下表所示。在該示例中, 使用 HeLa 細胞裂解物評價 Invitrogen c-Myc (總) 人 ELISA 試劑盒。在檢測的動態(tài)范圍內(nèi),用試劑盒隨附的標準稀釋緩沖液稀釋 HeLa 細胞裂解物。測量值與預(yù)期值顯示出良好的檢測線性,并且沒有來自樣品基質(zhì)的明顯干擾。
HeLa 細胞在 37°C 下,含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 中生長,并用 細胞提取緩沖液裂解,并進行超聲處理。將該裂解物在標準稀釋緩沖液中稀釋至檢測范圍,并測量 c-Myc(總量)。檢測結(jié)果與預(yù)期濃度的線性回歸檢測產(chǎn)生的相關(guān)系數(shù)為0.99。
細胞裂解物 | |||
稀釋 | 測量值(pg/mL) | 預(yù)期值(pg/mL) | % 線性 |
1/10 | 372.3 | 372.3 | 100 |
1/20 | 205.7 | 186.14 | 111 |
1/40 | 117.2 | 93.1 | 126 |
1/80 | 56.0 | 46.54 | 120 |
1/160 | 25.8 | 23.3 | 111 |
1/320 | 8.8 | 11.6 | 76 |
回收率用于確定分析物檢測是否受樣品基質(zhì)差異的影響;|(zhì)(如血清和血漿)可能具有干擾因素,影響 ELISA 準確定量分析物的能力。
通過將已知量的分析物加標到不同樣品基質(zhì)中來驗證回收率。進行檢測并確定回收率。通常,如果平均回收率為 80%-120%,則認為樣品基質(zhì)對檢測準確定量分析物的能力影響最小。
右表是用于報告回收率的典型格式。在該示例中, 檢測了 Invitrogen 脂聯(lián)素人 ELISA 試劑盒在 5 份不同血漿樣品中的回收率。
樣品編號 | 平均回收率 (%) |
1 | 99.6 |
2 | 99.8 |
3 | 100.2 |
4 | 92.5 |
5 | 91.8 |
ELISA 靈敏度
靈敏度定義為可與背景區(qū)分的最低分析物水平。這通常稱為分析靈敏度或檢測限。通過將零標準重復(fù)獲得的平均 O.D. 加上 2 個標準偏差來確定靈敏度。
例如, Invitrogen Tau (磷酸化) [pT181] 人 ELISA KI 靈敏度 <為 10 pg/mL。這表明測試的每個試劑盒批次的靈敏度均低于 10pg/mL。用于報告 ELISA 測定靈敏度的典型規(guī)格是 " 人 Tau [pT181] <的最低檢測濃度為 10 pg/mL。這通過零標準檢測 64 次時獲得的平均 O.D. 加上兩個標準偏差來確定。
ELISA 特異性進行特異性測試以驗證檢測到的目標分析物與其他密切相關(guān)的分子未發(fā)生交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果或不準確定量。為了確保僅識別所需的分析物,對一組其他物質(zhì)進行交叉反應(yīng)性測試。
例如, 通過篩選 20 種不同物質(zhì)的交叉反應(yīng)性,對 Invitrogen IL-6 小鼠 ELISA 試劑盒的特異性進行了檢測。用于報告 ELISA 特異性結(jié)果的典型格式是 " 使用 IL-6 小鼠 ELISA 試劑盒檢測了一組 10 , 000 pg/mL 的物質(zhì)的緩沖溶液。 1β γ 檢測后發(fā)現(xiàn)無交叉反應(yīng)性:小鼠 IL-1 β , IL-2 , IL-4 , IL-10 , IFN- β , TNF- α ;大鼠 1β IL-1 β , IL-2 , IL-4 , IL-6 , IFN- γ , TNF- α ;人 IL-2 , IL-4 , IL-6 , IL-10 , IL-12 , IFN- γ , TNF- α ;豬 IL-8
ELISA 質(zhì)量控制ELISA 的生產(chǎn)過程涉及高質(zhì)量生產(chǎn)標準,以確保高質(zhì)量 ELISA 試劑盒的一致生產(chǎn);疽蛩匕ā獓栏竦奈臋n和記錄保存,人員培訓(xùn),質(zhì)量控制程序,設(shè)施和設(shè)備維護,關(guān)鍵流程的驗證,原材料控制,可追溯性,環(huán)境監(jiān)測,變更控制, 和符合監(jiān)管標準。
ELISA 移液和洗滌技術(shù)技巧移液技巧
1. 使用符合制造商建議范圍內(nèi)的正確移液器
2. 確認吸頭已牢固地插與移液器上
3. 確認移液時沒有氣泡
4. 在每個標準品,樣品或試劑之間更換吸頭
5. 每種試劑使用不同的儲液槽
6. 將樣品吸取到孔的側(cè)面,避免飛濺
7. 始終進行樣品 / 標準品復(fù)孔設(shè)置
洗滌流程1. 通過將吸頭輕輕地降低到每個孔底部,完全吸液所有孔中的液體。 備注:小心操作,不要劃傷孔內(nèi)側(cè)。
2. 用至少 400 μ L ?L 的洗滌緩沖液填充孔
3. 浸泡 15 到 30 秒
4. 從孔中吸出洗滌緩沖液
5. 按照提示重復(fù)方案 (通常 3-4 次)
6. 清洗完成后,翻轉(zhuǎn)孔板并在吸水組織上輕敲 (必要時用力) 干燥。確保清除所有殘留的液體。
7. 或者,也可使用洗瓶或自動洗板機。請務(wù)必 遵循上述內(nèi)容。
實驗步驟
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品):每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管,每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果,每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
注意事項劑盒的儲存
1. 未開封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意,收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液,終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
2. 使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
須知:
試劑盒內(nèi)酶標條可拆卸,按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在驗后1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標簽為準,保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
DUMABIO ELISA檢測試劑盒
公司與各大高校、醫(yī)院及權(quán)威科研單位保持著良好的合作關(guān)系,公司的產(chǎn)品質(zhì)量及服務(wù)態(tài)度得到了他們的一致認可。篤瑪生物本著客戶至上的原則為客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,公司產(chǎn)品有任何質(zhì)量的問題免費包退換(非人為因素造成的)。公司提供免費代測服務(wù),并且收到樣本七個工作日出結(jié)果,確保數(shù)據(jù)的準確性。
上海篤瑪生物科技有限公司
人胰島素樣生長因子2(IGF-2)elisa試劑盒@新聞動態(tài) 阿儀網(wǎng) IGF-2 ELISA Kit 96T/48T
人胰島素樣生長因子2(IGF-2)elisa試劑盒@新聞動態(tài) 阿儀網(wǎng)
試劑盒產(chǎn)品說明:IGFBP(胰島素樣生長因子結(jié)合蛋)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白是一組能夠和胰島素樣生長因子(IGF)以高親和力結(jié)合的可溶性蛋白,綜們不僅攜帶IGF,延長IGF的半衰期,而且還調(diào)控IGF的生物活性,影響IGF的分布IGFBP。血清中的IGFBP23的濃度受雌激素、甲狀旁腺激素( PTH) 、糖皮質(zhì)激素等調(diào)控,其中生長激素(GH)是IGFBP23 的主要調(diào)控因子。根據(jù)對肝、腎等組織的研究,在體外IGFBP23 的表達可由IL21、TNF2αTGF2β、維A酸、骨源性蛋白21、雌二醇、前列腺素E2、糖皮質(zhì)激素和p53等調(diào)控。公司ELISA試劑盒優(yōu)點介紹:
更靈敏、特異性好、重復(fù)性強、更環(huán)保、經(jīng)濟實惠、實驗效果穩(wěn)定
產(chǎn)品種屬介紹:蝌蚪、駱駝、海馬、蝸牛、馬、大象、鴿子、類人猿、熊貓、貂、大鼠、小鼠、牛等動植物
人胰島素樣生長因子2(IGF-2)elisa試劑盒@新聞動態(tài) 阿儀網(wǎng)產(chǎn)品包裝介紹:液體長方體盒裝
產(chǎn)品保存介紹:恒溫四度(專家建議)
肌肌酸激酶(CKM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Creatine Kinase, Muscle (CKM) 48T/96T JW-E307 Homo sapiens (Human)
核糖核酸酶T2(RNASET2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ribonuclease T2 (RNASET2) 48T/96T JW-E308 Homo sapiens (Human)
N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase (NAGase) 48T/96T JW-E309 Homo sapiens (Human)
激活素AB(ACVAB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Activin AB (ACVAB) 48T/96T JW-E310 Homo sapiens (Human)
α2-纖溶酶抑制因子(α2PI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Alpha-2-Plasmin Inhibitor (a2PI) 48T/96T JW-E311 Homo sapiens (Human)
泛素(Ub)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ubiquitin (Ub) 48T/96T JW-E312 Homo sapiens (Human)
半乳糖苷酶β(GLβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Galactosidase Beta (GLb) 48T/96T JW-E313 Homo sapiens (Human)
脫氧核糖核酸酶Ⅰ樣2(DNASE1L2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Deoxyribonuclease I Like Protein 2 (DNASE1L2) 48T/96T JW-E314 Homo sapiens (Human)
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Alanine Aminotransferase (ALT) 48T/96T JW-E315 Mus musculus (Mouse)
丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK) 48T/96T JW-E316 Homo sapiens (Human)
補體1抑制因子(C1INH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Complement 1 Inhibitor (C1INH) 48T/96T JW-E317 Homo sapiens (Human)
補體成分3a受體1(C3aR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Complement Component 3a Receptor 1 (C3aR1) 48T/96T JW-E318 Homo sapiens (Human)
前列腺素F受體(FP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Prostaglandin F Receptor (FP) 48T/96T JW-E319 Homo sapiens (Human)
α-黑色素細胞刺激素(αMSH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Alpha-Melanocyte Stimulating Hormone (aMSH) 48T/96T JW-E320 Homo sapiens (Human)
雄烯二醇(AED)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Androstenediol (AED) 48T/96T JW-E321 General
對氧磷酶1(PON1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Paraoxonase 1 (PON1) 48T/96T JW-E322 Homo sapiens (Human)
胱天蛋白酶2(CASP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Caspase 2 (CASP2) 48T/96T JW-E323 Homo sapiens (Human)
著絲粒蛋白E(CENPE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Centromere Protein E (CENPE) 48T/96T JW-E324 人胰島素樣生長因子2(IGF-2)elisa試劑盒Homo sapiens (Human)
甘膽酸(CG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Cholyglycine (CG) 48T/96T JW-E325 Homo sapiens (Human)
肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Heparin Cofactor II (HCII) 48T/96T JW-E326 Homo sapiens (Human)
公司提醒:為了您獲得更理想的人胰島素樣生長因子2(IGF-2)elisa試劑盒實驗結(jié)果,請精確配制標準品及工作液A和B,以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;酶標板在溫育時應(yīng)加膜覆蓋以避免液體蒸發(fā);檢測液A和檢測液B,以及底物溶液在使用前,應(yīng)置于37℃溫育30分鐘待用;洗板后應(yīng)盡快進行下一步操作,避免酶標板長時間處于干燥狀態(tài)。
規(guī)格96T/48T
存儲條件:2-8℃ 避光儲存
有效期:6個月(可接受預(yù)定)
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等。
檢測種屬:人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠elisa檢測試劑盒等種屬。
適用范圍:此試劑盒僅用于科研實驗,禁用于臨床
elisa試劑盒,elisa檢測試劑盒,進口elisa試劑盒-上海潤裕生物方法類型和操作步驟:
elisa可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體,②酶標記的抗原或抗體,③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。
(一)雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下:
(1)將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
。2)加受檢標本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
。3)加酶標抗體:使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
。4)加底物:夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原的定性或定量。
根據(jù)同樣原理,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結(jié)合物,即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
(二)間接法測抗體
間接法是檢測抗體最常用的方法,其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:
(1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
(2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,在洗滌過程中被洗去。
(3)加酶標抗抗體:與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合,從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體,可用酶標羊抗人IgG抗體。
。4)加底物顯色:顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。
(三)競爭法
競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合,因此結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下:
。1)將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。
。2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標本中無抗原,則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標本中含有抗原,則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合,競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的機會,使酶標抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標抗原,保溫后,酶標抗原與固相抗體的結(jié)合可達最充分的量。洗滌。 。3)加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標抗原最多,故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡,表示標本中抗原含量越多。
凡購買elisa試劑盒,elisa檢測試劑盒,進口elisa試劑盒-上海潤裕生物等相關(guān)elisa試劑盒產(chǎn)品,我司擁有一流的技術(shù)團隊,完善的售后服務(wù)體系。公心語生物公司提供免費代測,需要代測單位的試驗材料和試劑等均須采用特快專遞形式郵寄,有低溫要求的、固定要求的,按低溫保存、固定防碎方法運輸,以確保實驗物品的安全可靠。如數(shù)量巨大,我司可以讓專業(yè)人員前往提取。詳情請與我司銷售人員聯(lián)系。
編號 | 中文名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
F2304-A | 人血管生成素1(ANG-1)elisa試劑盒 | Human Angiopoietin 1,ANG-1 elisa Kit | 48T |
人血管生成素1(ANG-1)elisa試劑盒廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中,我們來介紹一下更簡便的操作說明
1、人血管生成素1(ANG-1)elisa試劑盒操作方法一用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:(1).包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 (2).加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。 (3).加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。 (4).加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。 (5).終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。 (6).結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
2、人血管生成素1(ANG-1)elisa試劑盒操作方法二:用于檢測未知抗體的間接法: (1).用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。 (2).加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)(3).于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 (4).于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘 (5).于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml (6).可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。 ELISA是一種敏感性高、特異性強、重復(fù)性好的實驗診斷方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點,已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細胞因子等領(lǐng)域。
3、臨床標本的收集和保存 用于ELISA測定的臨床標本最為常用的是血清(漿),有時因為特定的檢測目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集,要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點之間,會有一峰值出現(xiàn):生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測定此類激素時,有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測定值。又如當從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r,血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測,應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的最適時間抽血檢測。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢測的血清標本的收集則沒有時間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮。
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。(5)標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。
4、試劑準備 在臨床實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準備最為關(guān)鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外,當試劑盒以O(shè)PD為底物時,則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制。
在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是唯一的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色。所以,有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。
四、溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。溫育這一步是臨床ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃ 30分鐘~1小時,進口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1~2小時才能有較完全的結(jié)合,低于1小時,可能會影響測定下限。因此,關(guān)于溫育,在實際測定操作中一定要注意以下幾點:要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。一般來說,加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時,孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需要一定的時間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時間可能還比較長,而在臨床實驗室中,很少有人注意這個問題,通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時,這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠,弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題,就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間,在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中,測定由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時,總是測不出來,不知原因為何?這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠,以致弱陽性樣本測定為陰性。因此,為保證37℃下足夠的溫育時間,臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時間孔內(nèi)溫度才能達到37℃,從而適當延長板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是,用一小溫度計放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可。
EK-Bioscience
Biotechnology Co., Ltd. Shanghai enzyme research
This kit is for in vitro research use, not for clinical diagnosis!
(本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷。
人胰島素(INS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
Human(INS)ELISA Kit
CAS.NO:EK-H11985
聲明:尊敬的客戶,感謝您選用本公司的人胰島素(INS)elisa試劑盒96T產(chǎn)品。本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中胰島素(INS)含量。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分!如有疑問,請及時聯(lián)系我們。
參數(shù)規(guī)格
中文名稱 | English name | 96T/48T 含量 | 保存 |
ELISA酶標板(可拆卸) | Microelisa stripplate | 8×12 / 8×6 * | 2-8℃ |
標準品(32mU/L) | Standard | 1瓶 0.5ml * | 2-8℃ |
標準品稀釋液 | Standard diluent | 1 瓶 1.5ml * | 2-8℃ |
酶標試劑 | HRP-Conjugate reagent | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
樣品稀釋液 | Sample diluent | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
顯色劑 A 液 | Chromogen Solution A | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
顯色劑 B 液 | Chromogen Solution B | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
終止液 | Stop Solution | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
濃縮洗滌液 | wash solution | 1 瓶20ml * | 2-8℃ |
說明書 | Instruction | 1份 * |
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封板膜 | Closure plate membrane | 2 片 * |
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密封袋 | Sealed bags | 1個 * |
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產(chǎn)品用途
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人胰島素(INS)水平。用純化的人胰島素(INS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(INS),再與HRP 標記的胰島素(INS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素(INS)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人胰島素(INS)濃度。
標本要求
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
5. 培養(yǎng)細胞:檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
7. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
8.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
試驗所需自備物品:
1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭
3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙5.人胰島素(INS)elisa試劑盒96T
操作流程
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
16mU/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
8mU/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
4mU/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2mU/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
1mU/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
實驗?zāi)康摹?/span>靈敏度、檢測范圍和重復(fù)性:
●實驗?zāi)康模簻y定人血清樣本中胰島素(INS)含量。
●靈敏度:最小可測 0.3mU/L。
●檢測范圍 0.5mU/L – 16mU/L。
●重復(fù)性:板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
問題分析
若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題描述 | 可能原因 | 相應(yīng)對策 |
標準曲線梯 度差 | 吸液或加液不準 | 檢查移液器及吸頭 |
標準品稀釋不正確 | 溶解標準品稍微旋轉(zhuǎn)瓶身,輕輕混勻使粉末完全溶解 | |
洗滌不完全 | 保證洗滌時間和洗滌次數(shù)及每孔的加液量 | |
顯色很弱或 無色
| 孵育時間太短 | 保證充足的孵育時間 |
實驗溫度不正確 | 使用推薦的實驗溫度 | |
試劑體積不夠或漏加 | 檢查吸液及加液過程,保證所有試劑按順序足量添加 | |
稀釋不正確 | ||
讀數(shù)數(shù)值低 | 酶標儀設(shè)置不正確
| 在酶標儀上檢查波長及濾光片設(shè)置 |
提前打開酶標儀預(yù)熱 | ||
變異系數(shù)大 | 加液不正確 | 檢查加液情況 |
背景值高
| 檢測抗體的工作濃度 | 使用推薦的稀釋倍數(shù) |
酶標板洗滌不完全 | 重新閱讀操作手冊,保證清洗完全;如果用自動洗板機,請檢查所有的出口是否有堵塞 | |
洗液有污染 | 配制新鮮的洗液 | |
靈敏度低 | ELISA 試劑盒保存 | 按說明書要求保存相關(guān)試劑 |
讀數(shù)前未終止 | OD 讀數(shù)前應(yīng)在每孔中加入終止液 |
聲明
1. 限于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平,尚不能對所有原料進行全面的鑒定分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準備充足的待測樣品。
3. 只有全部使用人胰島素(INS)ELISA試劑盒96T內(nèi)的試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。
4. 有效期:6 個月。
代測服務(wù)
凡購買我公司試劑盒,均可享受免費代測服務(wù)!
聯(lián)系時請?zhí)峁┊a(chǎn)品貨號,以便我們更高效地為您服務(wù)。 謝謝!
This kit is for in vitro research use, not for clinical diagnosis!
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠阿立新A(OrexinA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠阿立新A(OrexinA)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
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微孔酶標板 | | | |
標準品(800 pg/mL) | | | |
標準品稀釋液 | | | |
樣本稀釋液 | | | |
檢測抗體-HRP | | | |
20×洗滌緩沖液 | | | |
底物A | | | |
底物B | | | |
終止液 | | | |
封板膜 | | | |
說明書 | | | |
自封袋 | | | |
注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:800、400、200、100、50、25 pg/mL
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:檢測濃度小于10 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 期:6個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負責(zé)。
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。
FOR RESEARCH USE ONLY.
NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
Intended use
This OrexinA ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures. The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of OrexinA in the sample, this OrexinA ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus OrexinA concentration. The concentration of OrexinA in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.
Sample collection and storages
Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles
Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.
Materials required but not supplied
1. Standard microplate reader(450nm)
2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.
3. 37 ℃ incubator
Precautions
1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.
2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.
3. Mix all reagents before using.
Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)
Materials supplied
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Note: Standard diluent with Standard diluent concentration was followed by:
800、400、200、100、50、25 pg/mL
Reagent preparation
Assay procedure
1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.
2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.
3. Add Sample: Add testing sample 10μl Then add sample diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.
4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C.
5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.
6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.
7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.
Calculation of results
1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.
2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.
3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.
4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.
5. The sensitivity by this assay is 10 pg/mL.
6. Standard curve
Storage: 2-8℃.
validity: six months.
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產(chǎn)品名稱:人vav3鳥嘌呤核苷酸交換因子(VAV3)ELISA試劑盒僅用科研
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產(chǎn)品價格:請'來電咨詢'173 02193538 qq:245 0868877
應(yīng)用范圍:血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體(本產(chǎn)品僅供實驗室科研及非臨床用途)
研究領(lǐng)域:炎癥研究、神經(jīng)生物學(xué)、新陳代謝、信號通路、免疫學(xué)、傳染病、其他研究。
其他產(chǎn)品種屬:人ELISA試劑盒 小鼠ELISA試劑盒 大鼠ELISA試劑盒 兔ELISA試劑盒 倉鼠ELISA試劑盒 牛ELISA試劑盒 豚鼠ELISA試劑盒 魚ELISA試劑盒 雞ELISA試劑盒 馬ELISA試劑盒 豬ELISA試劑盒犬ELISA試劑盒 羊ELISA試劑盒 昆蟲ELISA試劑盒 植物ELISA試劑盒
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1、酶聯(lián)板(assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。2、標準品(standard):2瓶(凍干品)。3、樣品稀釋液(sample diluent):1×20ml/瓶。4、生物素標記抗體稀釋液(biotin-antibody diluent):1×10ml/瓶。5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (hrp-avidin diluent):1×10ml/瓶。6、生物素標記抗體(biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7、辣根過氧化物酶標記親和素(hrp-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8、底物溶液(tmb substrate):1×10ml/瓶。9、濃洗滌液(wash buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10、終止液(stop solution):1×10ml/瓶(2n h2so4)。
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