人抗斑疹傷寒抗體 ELISA Kit市場價(jià)格,人anti-typhus-Ab ELISA Kit檢測(cè)原理 現(xiàn)貨
實(shí)驗(yàn)原理:ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),人抗斑疹傷寒抗體 ELISA Kit市場價(jià)格,人anti-typhus-Ab ELISA Kit檢測(cè)原理 現(xiàn)貨受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
人磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 elisa kit代測(cè),人(pERK)elisa試劑盒規(guī)格:96T/48T 價(jià)格更優(yōu)惠 人磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶測(cè)定試劑盒檢測(cè)價(jià)格,人pERK ELISA試劑盒報(bào)價(jià) 現(xiàn)貨促銷 質(zhì)量有保證 進(jìn)口Human phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit試劑盒 實(shí)驗(yàn)代做人磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 elisa kit代測(cè),人(pERK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 價(jià)格更優(yōu)惠 人磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶測(cè)定試劑盒檢測(cè)價(jià)格,人pERK ELISA試劑盒報(bào)價(jià)人抗斑疹傷寒抗體 ELISA Kit市場價(jià)格,人anti-typhus-Ab ELISA Kit檢測(cè)原理 現(xiàn)貨 現(xiàn)貨促銷 質(zhì)量有保證 進(jìn)口Human phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit試劑盒 實(shí)驗(yàn)代做人血小板型磷酸果糖激酶 elisa kit代測(cè),人(PFKP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 價(jià)格更優(yōu)惠 人血小板型磷酸果糖激酶測(cè)定試劑盒檢測(cè)價(jià)格,人PFKP ELISA試劑盒報(bào)價(jià) 現(xiàn)貨促銷 質(zhì)量有保證 進(jìn)口Human phosphofructokinase-platelet,PFKP ELISA Kit試劑盒 實(shí)驗(yàn)代做人磷酸葡萄糖變位酶 elisa kit代測(cè),人(PGM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 價(jià)格更優(yōu)惠 人磷酸葡萄糖變位酶測(cè)定試劑盒檢測(cè)價(jià)格,人PGM ELISA試劑盒報(bào)價(jià) 現(xiàn)貨促銷 質(zhì)量有保證 進(jìn)口Human Phosphoglucomutase,PGM ELISA Kit試劑盒 實(shí)驗(yàn)代做人磷酸甘油酸變位酶2 elisa kit代測(cè),人(PGAM2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 價(jià)格更優(yōu)惠 人磷酸甘油酸變位酶2測(cè)定試劑盒檢測(cè)價(jià)格,人PGAM2 ELISA試劑盒報(bào)價(jià) 現(xiàn)貨促銷 質(zhì)量有保證 進(jìn)口Human phosphoglycerate mutase 2,PGAM2 ELISA Kit試劑盒 實(shí)驗(yàn)代做
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒使用目的:本試劑盒用于測(cè)定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中待測(cè)物質(zhì)的含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)水平。用純化的待測(cè)物質(zhì)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測(cè)物質(zhì),再與HRP標(biāo)記的待測(cè)物質(zhì)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)濃度。試劑盒組成人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):
計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6 個(gè)月
上海江萊生物科技有限公司專業(yè)供應(yīng)【人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒】,ELISA試劑盒現(xiàn)貨代測(cè),量大從優(yōu),部分ELISA試劑盒特價(jià)銷售。
英文名稱:Humananti-typhusantibodyELISA試劑盒
Elisa試劑盒操作方法:雙抗體夾心法/間接法,比較常用的是雙抗體夾心法。
在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:1.固相載體的選擇;2.包被抗體(或抗原)的選擇;3.酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇;4.酶的底物及供氫體的選擇.
用途:科研實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷.
特點(diǎn):靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好.
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 本公司多年專業(yè)酶免服務(wù),為國內(nèi)最專業(yè)的ELISA試劑盒供應(yīng)商之一,質(zhì)量保證,價(jià)格低,是國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及國內(nèi)各大院校長期指定供應(yīng)商,本公司實(shí)驗(yàn)室可免費(fèi)提供代測(cè)服務(wù),期待您的來電!
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人抗斑疹傷寒抗體定量檢測(cè)/anti-typhus-Ab elisa試劑盒 Human anti-typhus antibody ELISA Kit
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人抗斑疹傷寒抗體定量檢測(cè)/anti-typhus-Ab ELISA試劑盒 Human anti-typhus antibody ELISA Kit
Elisa實(shí)驗(yàn)常用方法: 雙抗體夾心法測(cè)定抗原
將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物;
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體);
加底物。底物的降解量=抗原量。
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英文名稱:Humananti-typhusantibodyELISA試劑盒主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。規(guī)格:96T/孔、48T/孔檢測(cè)范圍:歡迎QQ或電話索取原版說明書。保存溫度:低溫保存,詳情可來電。人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒說明書 ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。ELISA檢測(cè)試劑盒等公司產(chǎn)品滿足于生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物實(shí)驗(yàn)需求,不用于臨床診斷。歡迎來電了解更多詳情。中國老牌ELISA試劑盒供應(yīng)商-江萊生物,期待您的來電。更多詳情請(qǐng)登陸www.laibio.com,咨詢我司專業(yè)技術(shù)人員。人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒說明書 為您精選同類產(chǎn)品:
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人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒 參數(shù):
編號(hào) | 中文名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
F2789-A | 人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒 | Human anti-typhus antibody elisa Kit | 48T |
編號(hào) | 中文名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
F2789-A | 人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒 | Human anti-typhus antibody elisa Kit | 48T |
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒 廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,我們來介紹一下更簡便的操作說明,編號(hào):F2789-A,英文名稱Human anti-typhus antibody elisa Kit
1、人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒 操作方法一用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:(1).包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 (2).加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。 (3).加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。 (4).加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。 (5).終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。 (6).結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。
2、人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)elisa試劑盒 操作方法二:用于檢測(cè)未知抗體的間接法: (1).用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。 (2).加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)(3).于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 (4).于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘 (5).于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml (6).可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。 ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測(cè),既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。
3、臨床標(biāo)本的收集和保存 用于ELISA測(cè)定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清(漿),有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集,要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會(huì)有一峰值出現(xiàn):生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測(cè)定此類激素時(shí),有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測(cè)定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測(cè),應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的最適時(shí)間抽血檢測(cè)。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒有時(shí)間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮。
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。(3)血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
4、試劑準(zhǔn)備 在臨床實(shí)驗(yàn)室,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題,其直接的后果是對(duì)一些弱陽性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的是,在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。
在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是唯一的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽性,下次測(cè)定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。
四、溫育溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗最為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時(shí)間相對(duì)較短。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。溫育這一步是臨床ELISA測(cè)定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘~1小時(shí),進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1~2小時(shí)才能有較完全的結(jié)合,低于1小時(shí),可能會(huì)影響測(cè)定下限。因此,關(guān)于溫育,在實(shí)際測(cè)定操作中一定要注意以下幾點(diǎn):要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間。一般來說,加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí),孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需要一定的時(shí)間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時(shí)間可能還比較長,而在臨床實(shí)驗(yàn)室中,很少有人注意這個(gè)問題,通常是將微孔板一放入溫箱即開始計(jì)時(shí),這樣就很容易造成實(shí)際測(cè)定中溫育時(shí)間不夠,弱陽性樣本測(cè)不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個(gè)問題,就是在每一年的冬季總有那么一個(gè)多月的時(shí)間,在做HBsAg測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控中,測(cè)定由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時(shí),總是測(cè)不出來,不知原因?yàn)楹?這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠,以致弱陽性樣本測(cè)定為陰性。因此,為保證37℃下足夠的溫育時(shí)間,臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時(shí)間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃,從而適當(dāng)延長板條在溫箱中的放置時(shí)間。具體的做法是,用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測(cè)量觀察即可。