1. 細胞貼壁性較差,容易飄起來,37℃靜置可重新貼壁。換液時注意不要用力搖晃培養(yǎng)瓶,否則有可能會把細胞搖下來。
2. 細胞容易消化,消化下來的細胞容易成團,要吹打吹散。否則傳代后細胞會成團生長,不均勻,影響實驗結(jié)果。
3. 當細胞生長至匯合率達到80~90%需要對細胞進行傳代操作,以擴大細胞數(shù)量,維持細胞良好的生長狀態(tài)。
4. 隨著傳代的次數(shù)增加,293T細胞會出現(xiàn)生長狀態(tài)下降,出現(xiàn)突變等情況。所以要在細胞購進時就進行大量凍存,以保證實驗的穩(wěn)定性和持續(xù)性。
收到細胞后如何操作:1、先,觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請及時與我司技術(shù)支持聯(lián)系。
2、用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),隔天再取出進行觀察。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。
4、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中,備用;細胞傳代時,可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用,讓細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。
5、確認細胞狀態(tài)良好后,應及時將細胞凍存,再進行后續(xù)的實驗,避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失。
6、建議客戶收到細胞后3天,100X、200X、400X各拍3-5張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我們技術(shù)支持溝通交流。
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