實驗要點及說明:1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品信息:
產(chǎn)品名稱:HBL-100 (人整合SV40基因的乳腺上皮細胞) 規(guī)格:1×10⁶cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號:GOY-01X0090
分類:細胞系
產(chǎn)品詳細介紹:名稱HBL-100 (人整合SV40基因的乳腺上皮細胞)
別稱HBL 100; HBL100
種屬人類
年齡(性別)女性,27歲
組織來源乳腺
生長特性貼壁細胞
細胞形態(tài)上皮細胞樣
背景描述HBL-100細胞是由E·V·Gaffney及其同事從一位沒有乳癌家族史的供者乳汁中建立的一株上皮細胞;培養(yǎng)出來的HBL-100細胞染色體組型在第7代時就不正常。電鏡照片顯示,HBL-100細胞內(nèi)有微絲、張力原纖維和橋粒。Southern轉(zhuǎn)移表明,HBL-100細胞有整合型SV40病毒基因,不可以當作正常細胞。
生物安全等2
生長培養(yǎng)基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例1:2-1:4
推薦換液頻率2~3次/周
倍增時間~40小時
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
致瘤性Yes, in nude mice.
抗原表達情況HLA A1 A10 A11 B7 B8
實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作步驟:1、貼壁細胞的消化①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA KitELISA.96T/48T人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA KitELISA.96T/48T人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA KitELISA.96T/48T人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人脂蛋白α(Lp-α)ELISA KitELISA.96T/48T人脂蛋白α(Lp-α)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA KitELISA.96T/48T人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人Ⅰ型膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA KitELISA.96T/48T人Ⅰ型膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA KitELISA.96T/48T人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA KitELISA.96T/48T人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
人骨橋素(OPN)ELISA KitELISA.96T/48T人骨橋素(OPN)ELISA Kit ELISA. 96T/48T
采樣吸取液1-GVPC液體培養(yǎng)基添加劑 1ml*3支/管
硝酸鹽肉湯(還原)(軍團菌) 20支/盒
馬尿酸鈉(軍團菌) 20支/盒
HBL-100 (人整合SV40基因的乳腺上皮細胞) 尿素酶生化管(軍團菌) 20支
明膠液化生化管(軍團菌) 20支/盒
麥芽糖發(fā)酵管(軍團菌) 20支
葡萄糖發(fā)酵管(軍團菌) 20支
乳糖發(fā)酵管(軍團菌) 20支
銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)
假單菌瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基/CN瓊脂 CN Agar 250g
關(guān)鍵詞:
HBL-100 (人整合SV40基因的乳腺上皮細胞)
上海谷研實業(yè)有限公司主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的銷售,主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產(chǎn)品。銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司產(chǎn)品。
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